製造及保存方式

製造方式

本核心實驗室係利用三質體轉染HEK293細胞方式進行AAV生產。三種質體包含帶有使用者欲表現之基因、可提供AAV rep和cap基因、及提供複製所必須之腺相關病毒基因的質體。經過氯化銫梯度離心後收集高病毒濃度的部分,經去鹽化及0.2 mm濾膜過濾後,利用Roche light cycler® realtime PCR定量及SDS-PAGE確定純度後提供給使用者。

保存方式

  1. 本核心實驗室所提供的AAV在經過純化及去鹽分步驟後,保存於D-PBS當中,使用者可直接進行實驗,如需稀釋請利用D-PBS或生理食鹽水。
  2. 避免反覆冷凍解凍,即使相較其他病毒而言AAV相對穩定,次數過多的冷凍解凍仍會減少病毒的titer和活性。
  3. 長期保存:請使用者在第一次解凍AAV後立刻進行分裝,保存於-80oC冰箱。
  4. 短期保存: AAV可於4oC中保存1-2禮拜,此期間titer並不會有顯著的改變。