核心設施 Core Facilities

腺病毒研究室 Adenovirus Lab

部門介紹 INTRODUCTION
腺病毒載體（recombinant adenovirus vector, Adv）是一個很有效率、使用範圍廣泛的基因轉殖工具，是細胞實驗與動物實驗很有用的基因傳遞工具。
Adv載體與基因傳遞特點：
  1. 可以使用於細胞實驗。相較於AAV以感染動物實驗為主，Adv可以使用於細胞實驗，感染很多種類的細胞，容易操作，效率高，表現速度快。
  2. 可以使用於動物實驗。經由血管或組織注射，可以有效感染不同器官的細胞。
  3. 可以調控表現量，沒有感染後不易表現的問題。
  4. 不會嵌入細胞的染色體，不需要擔心改變染色體的結構。
  5. 可以同時感染數個不同的病毒，同時表現不同基因。
  6. 基因表現時間會因不同Adv而有所不同，從數周到數個月不等。
 
核心實驗室已經從事腺病毒載體的製備超過20年，服務對象包含國內外各大專院校與研究機構。我們已經發展出一套有效率的腺病毒製備方式，可以有效的提高裝備腺病毒載體成功機率，並有效的大量複製腺病毒載體。
 
腺病毒載體（recombinant adenovirus vector, Adv）是一個很有效率、使用範圍廣泛的基因轉殖工具，是細胞實驗與動物實驗很有用的基因傳遞工具。
Adv載體與基因傳遞特點：
1. 可以使用於細胞實驗。相較於AAV以感染動物實驗為主，Adv可以使用於細胞實驗，感染很多種類的細胞，容易操作，效率高，表現速度快。
2. 可以使用於動物實驗。經由血管或組織注射，可以有效感染不同器官的細胞。
3. 可以調控表現量，沒有感染後不易表現的問題。
4. 不會嵌入細胞的染色體，不需要擔心改變染色體的結構。
5. 可以同時感染數個不同的病毒，同時表現不同基因。
6. 基因表現時間會因不同Adv而有所不同，從數周到數個月不等。
 
核心實驗室已經從事腺病毒載體的製備超過20年，服務對象包含國內外各大專院校與研究機構。我們已經發展出一套有效率的腺病毒製備方式，可以有效的提高裝備腺病毒載體成功機率，並有效的大量複製腺病毒載體。
Adenovirus vector (Adv) is a very power tool for gene transfer to deliver and overexpress gene(s) in vivo and in vitro. 
Functions and features of Adv-mediated gene transfer:
  1. For cell culture study: compared to AAV which is used for animal study, Adv can infect various cell types, easy to handle, gene expression is relatively fast, expression level can be controlled by amount of Adv used and there is no 
  2. For animal study: Through i.v. or intra-tissue injection, Adv can infect various tissue cells.
  3. Controlled expression level: by varied amount of Adv infection, various gene expression levels can be achieved. There is no permissive problem as compared with other viral vectors.
  4. No chromosome integration. 
  5. Cells can be infected by multiple Adv to express multiple genes.
  6. Gene expression period from several weeks to several months or longer, depends on different type of Advs. 
 
The core laboratory has been working on Adv for more than 20 years, we have construct hundreds of Advs for the scientists in Taiwan and all over the world. We have developed a special protocol to construct Adv with very high efficiency and have a SOP for large-scale amplification. 
 

1.Adv packaging:

本核心實驗室會提供所必需的載體, 實驗室需自行將所需基因置入載體，並做完蛋白質表現的確認，本核心實驗室才會開始從事病毒的裝備與複製。

 

2.Single plaque isolation:

1.將packaging 完成的 Adv稀釋後感染HEK293細胞，分single plaque.

2.將提供6個single plaque分離後的Adv.

 

3.Large-scale amplification

1.產生的病毒足夠使用於小型動物實驗與細胞實驗。

2.大量複製將使用80盤15公分的293細胞來複製病毒，初步分離後，經過兩次的超高速離心，將病毒純化，分裝後存儲於 -75°C冷凍庫。同時使用plaque assay 來定病毒的titer[plaque forming unit (pfu)] 並做RCA assay 確定沒有會自行複製的病毒。

3.客戶委託大量複製前，需先證實該病毒可以表現需要的蛋白與能。

4.核心實驗室將先少量複製病毒，在做大量複製（80盤15cm）前提供客戶樣品供驗證蛋白的表現與功能。

 

4.Small-scale amplification

1.產生的病毒量較少，以細胞實驗為主，動物實驗可能不足。

2.小量複製將使用20盤15公分的293細胞來複製病毒。製備過程與大量複製相同。

 

5.Crude cell lysate amplification:

若不需純化病毒與titer等檢驗，核心實驗室可提供 5 盤15公分的Crude cell lysate（Titer: 1~5x10E6/ul）

 

6.常用腺病毒小包裝 Purified control and common Adv (50 ul)

核心實驗室有庫存部分控制組與常用的Adv，客戶可以少量購買。尤其是細胞實驗，少量的Adv就足夠做多次實驗。

 

其他：第二代腺病毒、腺病毒操作學習與相關問題，請與聯絡人聯繫。

 

 

聯絡人：譚家碧小姐； Tel: 02-27899153

Email：Tamkabik@ibms.sinica.edu.tw

Charges for adenoviral vector (AdV) services.

Items

生醫所

其他所中心a

Packaging (3 attempts)

5,000

6,000

Single plaque isolation & amplification

(>6 isolated plaques)

3,000

3,500

Large-Scale amplification

(~3 ml high titer, E7~E8/ul virus)*

42,000

48,000

Small-Scale amplification

(~1 ml high titer, E7~E8/ul virus)*

18,000

22,000

Crude cell lysate amplification

1,500

1,800

Purified control Adv (50ul)

(1~10 x 10E7 pfu/ul)*

2,000

2,400

Purified common Adv (50ul)

(1~10 x 10E7 pfu/ul)*

2,500

3,000

 

單位： NT＄

a院外研究機構請與聯絡人直接聯繫。

*: Titer of Adv may varied, depending on encoding gene and storage condition.

Purified control Adv:

Ad-CMV

Ad-PGK

Ad-GFP#

#: Small amount of Ad-GFP aliquot is available (free) for test infection.

Purified common Adv:

Ad-NFAT-Luc

Ad-Cre